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大型質(zhì)粒抽提試劑盒的提取與哪些因素有關(guān)
發(fā)布日期：
2019-03-15
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大型質(zhì)粒抽提試劑盒用堿裂解法從培養(yǎng)菌中提取質(zhì)粒DNA，采用*的溶液配方和內(nèi)毒素清除試劑，只需要幾次簡(jiǎn)單離心去除蛋白質(zhì)、多糖、內(nèi)毒素、RNA等雜質(zhì)，獲得高質(zhì)量的質(zhì)粒DNA。純化DNA的OD260/280通常在1.8左右，得到的質(zhì)?？芍苯討?yīng)用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染甚至動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)等對(duì)DNA純度要求很高的工作中。
1.提取的質(zhì)粒量與細(xì)菌培養(yǎng)濃度、質(zhì)粒拷貝數(shù)等因素有關(guān)。如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒或大于10kb 的大質(zhì)粒，應(yīng)加大菌體使用量，同時(shí)按比例增加P1、P2、PⅢ的用量。
2.提取大質(zhì)粒時(shí)操作動(dòng)作要輕柔，應(yīng)該使用剪大了開(kāi)口的吸頭，防止機(jī)械剪切對(duì)DNA的損壞。
3.DNA沉淀液沉淀離心后，可能看不到明顯沉淀。如未見(jiàn)沉淀，擔(dān)心DNA丟失，可保留上清液，待完成全部操作后電泳鑒定，以確定是否獲得終產(chǎn)物（數(shù)百微克DNA離心沉淀在管的側(cè)壁上，可能無(wú)法看到明顯團(tuán)塊）。
4.得到的質(zhì)粒DNA可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)檢測(cè)濃度與純度。OD260值為1相當(dāng)于大約50μg/ml DNA。電泳可能為單一條帶，也可能為2條或者多條DNA條帶，這主要是不同程度的超螺旋構(gòu)象質(zhì)粒泳動(dòng)位置不一造成，與提取物培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)短、提取時(shí)操作劇烈程度等有關(guān)。本公司產(chǎn)品正常操作情況下基本超螺旋可以超過(guò)95%。
5.質(zhì)粒DNA確切分子大小， 必須酶切線性化后，對(duì)比DNA分子量Marker才可以知道。處于環(huán)狀或者超螺旋狀態(tài)的質(zhì)粒，泳動(dòng)位置不確定，無(wú)法通過(guò)電泳知道確切大小。
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